Προπαρασκευαστική φάση
Το πρώτο μισό της γλυκόλυσης είναι η προπαρασκευαστική φάση. Ξεκινά με την προσθήκη μιας φωσφορικής ομάδας στη γλυκόζη (6-φωσφορική γλυκόζη). Στη συνέχεια η 6-φωσφορική γλυκόζη μετατρέπεται σε 6-φωσφορική φρουκτόζη. Προστίθεται άλλη μια φωσφορική ομάδα που τη μετατρέπει σε διφωσφορική φρουκτόζη -1,6-. Στη συνέχεια, η φρουκτόζη -1,6-διφωσφορική διασπάται στα δύο, με το ένα μέρος να μετατρέπεται σε G3P (φωσφορική γλυκεραλδεΰδη-3) και φωσφορική διυδροξυακετόνη. Η φωσφορική διυδροξυακετόνη μετατρέπεται σε G3P, αφήνοντάς μας τα δύο μόρια τριόζης G3P που χρησιμοποιούνται στη φάση Pay-off.
Φάση αποπληρωμής
Το δεύτερο μισό της γλυκόλυσης είναι γνωστό ως "φάση αποπληρωμής", λόγω του καθαρού κέρδους των πλούσιων σε ενέργεια μορίων ATP και NADH. Δεδομένου ότι η γλυκόζη οδηγεί σε δύο σάκχαρα τριόζης (G3P) στην προπαρασκευαστική φάση, κάθε αντίδραση στη φάση αποπληρωμής πραγματοποιείται δύο φορές ανά μόριο γλυκόζης. Έτσι προκύπτουν 2 μόρια NADH και 4 μόρια ATP, με αποτέλεσμα το καθαρό κέρδος από τη γλυκολυτική οδό να είναι 2 μόρια NADH και 2 μόρια ATP ανά μόριο γλυκόζης.
Περίληψη: 2ATP → 4ATP + 2(NADH + H+) + 2 πυρουβικό (καθαρή παραγωγή 2ATP)
Αερόβια αναπνοή
Τα κύτταρα που εκτελούν αερόβια αναπνοή (αναπνοή με χρήση οξυγόνου) συνθέτουν πολύ περισσότερο ΑΤΡ, αλλά όχι ως μέρος της γλυκόλυσης. Αυτές οι περαιτέρω αντιδράσεις χρησιμοποιούν το πυροσταφυλικό από τη γλυκόλυση.
Η αερόβια αναπνοή των ευκαρυωτών παράγει περίπου 30 επιπλέον μόρια ΑΤΡ για κάθε μόριο γλυκόζης. Η γλυκόλυση, μέσω της αναερόβιας αναπνοής, είναι η κύρια πηγή ενέργειας σε πολλά κύτταρα.